馬鈴薯Y病毒檢測的技術特點及操作流程

更新時間：2023-02-19

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　　馬鈴薯Y病毒檢測病自幼苗到成株期都可發病，但以大田成株期發病較多。該病為系統侵染，整株發病。煙草感染PVY后，因品種和病毒株系的不同所表現的癥狀特點亦有明顯差異，宏觀癥狀大致分為4種類型。

　　馬鈴薯Y病毒檢測的特點：

　　1.專一性強。抗原與抗體的免疫反應是專一反應，而免疫酶技術以免疫反應為基礎，所檢測的對象是抗原（或抗體），使用的抗體除標記了酶以外，與普通抗體的免疫反應特性并無多大差別。

　　2.靈敏度高。由于抗體聯結上了酶，因此，借助于酶與底物的顯色反應，顯示抗原與抗體的結合，大大提高了檢測的靈敏性，使檢測水平接近放射免疫測定法。

　　3.樣品易保存。經過酶反應顯示的有色產物大多比較穩定，因此有利于樣品的保存。

　　4.結果易觀察。對檢測結果即可用肉眼觀察，又可用顯微鏡觀察，也可以用分光光度計進行比色測定，還可用顯微鏡觀察。這是因為某些酶反應產物能使電子密度發生改變，從而引起被檢測物的顯示。

　　5.可以定量測定。溶液中的抗原物質，應用酶免吸附技術進行比色測定，依據光密度值的變化，可以定量。預計用細胞分光光度計可對組織內的抗原進行免疫酶技術的定量測定。

　　6.可以大規模測定樣品。如有成千上萬份樣品需要進行檢測，免疫酶技術都能在較短時間內完成。

　　7.儀器和試劑簡單。對免疫沒技術來說，不需要熒光顯微鏡，也不需要測定放射性的特殊儀器，所用儀器及試劑均屬一般性儀器與試劑，普通實驗室及生產應用單位均易購置。

　　馬鈴薯Y病毒檢測的操作流程：

　　1.從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回4℃。

　　2.設置標準品孔和樣本孔，標準品孔各加不同濃度的標準品50μl；

　　3.樣本孔中加入待測樣本50μl；空白孔不加。

　　4.除空白孔外，標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶（hrp）標記的檢測抗體100μl，用封板膜封住反應孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。

　　5.棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液（350μl），靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復洗板5次（也可用洗板機洗板）。

　　6.每孔加入底物a、b各50μl，37℃避光孵育15min。

　　7.每孔加入終止液50μl，15min內，在450nm波長處測定各孔的od值。