淺析黃瓜綠斑駁花葉病毒檢測(cè)常用的兩種方式

更新時(shí)間：2023-06-25

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　　黃瓜綠斑駁花葉病毒（Cucurbitgreenmottlemosaicvirus，CGMMV）是一種常見(jiàn)的植物病毒，對(duì)黃瓜等瓜類作物造成嚴(yán)重的危害。為了及時(shí)發(fā)現(xiàn)和控制病毒的傳播，需要進(jìn)行CGMMV檢測(cè)。

　　黃瓜綠斑駁花葉病毒檢測(cè)方法主要包括生物學(xué)檢測(cè)和分子生物學(xué)檢測(cè)兩種：

　　一、生物學(xué)檢測(cè)

　　生物學(xué)檢測(cè)是通過(guò)觀察寄主植物對(duì)病原的反應(yīng)來(lái)確定是否感染CGMMV。該方法適用于大規(guī)模場(chǎng)地測(cè)試，操作簡(jiǎn)便，不需要特殊設(shè)備。具體步驟如下：

　　1.選擇可疑樣本：選取經(jīng)過(guò)初步篩選的植株或組織樣本，如葉片、果實(shí)等。

　　2.種子接種：將種子在含有CGMMV的培養(yǎng)基上接種，經(jīng)過(guò)一定時(shí)間的孵育，觀察種子萌發(fā)情況。

　　3.植株接種：將已經(jīng)發(fā)芽的種子移植到含有CGMMV的土壤中，觀察植株對(duì)病毒的反應(yīng)，如葉面出現(xiàn)黃化、凋萎、變形等癥狀。

　　4.酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）：用ELISA檢測(cè)植株中是否存在CGMMV抗原，該方法快速、便捷、準(zhǔn)確。

　　二、分子生物學(xué)檢測(cè)

　　分子生物學(xué)檢測(cè)是通過(guò)檢測(cè)CGMMV基因組DNA或RNA特異性序列來(lái)確定是否感染，具有高靈敏度和高特異性的優(yōu)點(diǎn)。分子生物學(xué)檢測(cè)的主要方法包括PCR擴(kuò)增和實(shí)時(shí)熒光定量PCR（qPCR）。

　　1.PCR擴(kuò)增：PCR擴(kuò)增是一種非常常用的檢測(cè)CGMMV的方法，其主要步驟如下：

　　（1）提取樣本總RNA/DNA，使用逆轉(zhuǎn)錄酶將RNA轉(zhuǎn)錄成cDNA；

　　（2）PCR擴(kuò)增：利用CGMMV特異性引物，在PCR擴(kuò)增過(guò)程中擴(kuò)增出CGMMV特異性片段；

　　（3）聚丙烯酰胺凝膠電泳：將擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng)過(guò)處理后，進(jìn)行聚丙烯酰胺凝膠電泳。

　　2.實(shí)時(shí)熒光定量PCR：qPCR是一種基于PCR技術(shù)的快速檢測(cè)方法，具有高靈敏度、高特異性、快速、準(zhǔn)確等優(yōu)點(diǎn)，適用于小樣本檢測(cè)。該方法主要步驟如下：

　　（1）提取樣本總RNA/DNA，使用逆轉(zhuǎn)錄酶將RNA轉(zhuǎn)錄成cDNA；

　　（2）qPCR反應(yīng)體系：添加CGMMV特異性引物和探針到反應(yīng)混合物中，通過(guò)熒光信號(hào)檢測(cè)擴(kuò)增產(chǎn)物的數(shù)量。

　　對(duì)于黃瓜綠斑駁花葉病毒檢測(cè)十分重要，及時(shí)發(fā)現(xiàn)和控制病毒的傳播能夠保障農(nóng)業(yè)生產(chǎn)的穩(wěn)定性。目前，生物學(xué)檢測(cè)和分子生物學(xué)檢測(cè)是常用的CGMMV檢測(cè)方法，各具優(yōu)缺點(diǎn)，需要根據(jù)實(shí)際情況選擇適合的檢測(cè)方法。